Sintesis recombinant Human-erythropoietin (hEPO) pada Barley Stripe Mosaic Virus (BSMV) dan yeast Pichia pastoris

Pelaksana : Adi Santoso
Abstrak
Human erythropoietin (hEPO) adalah glycoprotein yang bersifat seperti hormon dan mempunyai berat molekul sebesar 37.000 Daltons.
Human EPO sangat esensial dalam regulasi sintesis sel darah merah. Menurunnya kandungan EPO dalam tubuh dapat menyebabkan anemia. Beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa penggunaan recombinant hEPO sangat efektif untuk menyembuhkan anemia.
Pada penelitian ini dua system (BSMV dan yeast Pichia pastoris) digunakan untuk mensintesa recombinant hEPO. Pada BSMV, gen hEPO diinsersikan pada γ genome virus BSMV yang kemudian diinokulasikan pada tanaman barley. Pada sistim P. pastoris, gen hEPO diinsersikan pada plasmid pPICZαB yang kemudian ditransformasikan pada genom P. pastoris. P. pastoris mempunyai beberapa keuntungan untuk produksi protein rekombinan, diantaranya adalah: ekspresi yang efisien dengan menggunakan methanol inducible alcohol oxidase gene (AOX1) promoter dan tingkat ekspresi protein rekombinan yang sangat tinggi, sekresi yang efisien, dan proses fermentasi pada densitas sel yang sangat tinggi. Hal ini akan membuat downstream processing akan menjadi sangat efisien.
Hasil analisa sementara menunjukkan bahwa sistim ekspresi pada yeast lebih efisien dibandingkan dengan sistem BSMV. Karakterisasi dengan menggunakan teknik immunologi menunjukkan bahwa hEPO yang didapat dari yeast mempunyai kesamaan yang sangat tinggi dengan hEPO control (dari Merck-Calbiochem). Hasil analisa glycosylation dengan menggunakan enzyme O- dan N-glycosidase juga menunjukkan kemiripan yang sangat tinggi. Pada saat ini proses analisa biologis secara in vivo dan in vitro segera dilakukan. Penghitungan reticulocytes sebagai refleksi proses sintesis darah merah digunakan sebagai standar untuk menganalisa fungsi biologis recombinant hEPO yang dihasilkan.

Kata Kunci : Human erythropoietin, BSMV, Pichia pastoris, RUT 2007 P2 Biotek LIPI