Ekspresi Protein Bernilai Tinggi pada Tembakau: Human Serum Albumin

Pelaksana : Arief Budi Witarto, Desriani, Rahayu, Suwarti, Ahmad Furqoni
Abstrak
Pertumbuhan tembakau transgenik var. Petit Havana SR 1 yang mengandung gen target human serum albumin/HSA dan gen penanda OsRed dengan tembakau var.
yang sama tapi non-transgenik di rumah kaca transgenik pada dataran tinggi dan dalam pot tidak menunjukkan perbedaan tinggi dan jumlah daun/biomassa. Data pertumbuhan tembakau var. lokal sebanyak 13 jenis pada dataran tinggi dalam tanah juga telah diperoleh termasuk biomassa (260-1.100 g) dan waktu berbunga (68-8 I hari). Penanaman pada kondisi yang sama dalam pot di dataran rendah menunjukkan tembakau var. lokal menghasilkan biomassa dua kali lipat lebih besar daripada tembakau var. SRI. Pemurnian protein rekombinan dari daun telah dilakukan dengan upaya awal untuk memurnikan OsRed. Dengan menggunakan pengendapan ammonium sulfat dan kromatografi kolom penukar anion OEAE-Sepharose, telah diperoleh fraksi yang mengandung protein OsRed murni seperti dikonfirmasi dengan SDS-PAGE, fluoresens spektroskopi dan aktivitas fluoresensinya. Data pertumbuhan induksi tunas pada 18 jenis tembakau var. lokal telah diperoleh dengan tingkat kemampuan 60-100 %. Transformasi pada tembakau var. lokal menggunakan bantuan Agrobacterium tumefaciens dan plasmid pCAMBIA 2310 telah berhasil dilakukan. Ekspresi protein target HSA telah dikonfirmasi pada tembakau var. SR 1 yang menggunakan Western Blot dan ELISA. Pada daun, diperoleh tingkat ekspresi 2,7-5,0 µg/g daun basah. Hasil ini sebanding dengan data yang diperoleh di Fraunhofer IME-Jerman.

Kata kunci: Human serum album/HSA, Molecular farming, Tembakau var. lokal, Tembakau var. SR I, Biomassa. Pulrifikasi, OsRed, ELISA, Spec. Prog 2007 P2 Biotek LIPI